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dc.creatorAlves, Douglas Alexsander-
dc.date.accessioned2019-01-14T11:31:20Z-
dc.date.available2019-01-14T11:31:20Z-
dc.date.issued2018-07-26-
dc.identifier.citationALVES, Douglas Alexsander. Mapeamento de epítopos baseado em peptídeos na caracterização do anticorpo FabC4. 2018. 74 f. Dissertação (Mestrado em Genética e Bioquímica) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2018. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.811.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.ufu.br/handle/123456789/23802-
dc.description.abstractPhage Display is a molecular technique by which exogenous proteins are expressed on the virus surface. It is an extremely powerful tool to select peptides with specific binding properties from a wide number of variants. Regarding tumors, Phage Display is a promising technology for the selection of targets with clinical relevance, being capable of recognize cancer molecular diversity. Here we describe the characterization of a new FabC4 antibody, made with Phage Display technique, clinically relevant for breast cancer (BC) diagnosis and prognostic purposes. In this study, a bioprospecting assay was done against FabC4 in order to map its epitopes, after using a subtractive selection against an irrelevant Fab, and elution in two steps: with non-malignant proteins, which were discarded, and against BC proteins, which were amplified. By using Phage-ELISA, four of selected clones were able to differentiate serum samples of patients with BC, from serum of patients with benign disease and healthy women. The peptides were chemically synthesized (pA5, pA7, pC4 e pD6) and bound to FabC4. The pC4 demonstrated higher specificity when compared to the others peptides (p<0.05). However, only pD6 peptide was able to differentiate neoplastic samples. Also, we showed for the first time, by immunofluorescence, the cytoplasmic co-localization of annexin A2 (ANXA2) and cytokeratin 10 (CK10) in MDA-MB-231 cell line, suggesting a new molecular behavior of these proteins on triple-negative BC (TNBC). Molecular docking analysis confirmed interactions between FabC4 and the peptides, with better coverage and identity for pC4. This peptide also mimicked ANXA2 and CK10 protein regions that bind to FabC4. Therefore, we described new molecules for the diagnosis of TNBC and our strategy resulted on a successful mapping of FabC4 epitopes, opening new perspectives to better understand and treat TNBC.pt_BR
dc.description.sponsorshipCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorpt_BR
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de Uberlândiapt_BR
dc.rightsAcesso Embargadopt_BR
dc.subjectPeptídeo miméticopt_BR
dc.subjectCâncer de Mamapt_BR
dc.subjectAnticorpo recombinantept_BR
dc.subjectPhage Displaypt_BR
dc.subjectMamas - Câncerpt_BR
dc.subjectPeptídeospt_BR
dc.subjectGenéticapt_BR
dc.subjectBreast Cancerpt_BR
dc.subjectPhage Displaypt_BR
dc.subjectMimotope peptidept_BR
dc.subjectRecombinant antibodypt_BR
dc.titleMapeamento de epítopos baseado em peptídeos na caracterização do anticorpo FabC4pt_BR
dc.title.alternativePeptide-based epitope mapping in FabC4 antibody characterizationpt_BR
dc.typeDissertaçãopt_BR
dc.contributor.advisor-co1Goulart Filho, Luiz Ricardo-
dc.contributor.advisor-co1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4781012P8pt_BR
dc.contributor.advisor1Araújo, Thaise Gonçalves de-
dc.contributor.advisor1Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4759805D8pt_BR
dc.contributor.referee1Barros, Luciana Rodrigues Carvalho-
dc.contributor.referee2Goulart, Vivian Alonso-
dc.creator.Latteshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4301365P2pt_BR
dc.description.degreenameDissertação (Mestrado)pt_BR
dc.description.resumoPhage Display é uma técnica molecular pela qual proteínas exógenas são expressas na superfície de partículas virais. Esta é uma ferramenta extremamente poderosa para selecionar peptídeos ligantes específicos dentre um vasto número de variantes. Considerando tumores, é uma tecnologia promissora na seleção de alvos com relevância clínica, capaz de reconhecer sua diversidade molecular. Nós caracterizamos, por Phage Display, um novo anticorpo FabC4 com relevância clínica no diagnóstico e prognóstico do Câncer de Mama (CM). Neste estudo, foi realizado um ensaio de bioprospecção contra o FabC4 para mapear seus epítopos, após seleção subtrativa contra um Fab irrelevante e eluição em duas etapas: contra proteínas não malignas, que foram descartadas, e contra proteínas de CM, as quais foram amplificadas. Quatro dos clones selecionados diferenciaram, por Phage-ELISA, amostras de soros de pacientes com CM, de doença benigna da mama (DBM) e de mulheres saudáveis. Os peptídeos correspondentes quimicamente sintetizados (pA5, pA7, pC4 e pD6) se ligaram ao FabC4. O que apresentou maior afinidade ao FabC4 foi o pC4 (p<0,05 quando comparada às demais). Contudo, apenas o pD6 diferenciou as amostras neoplásicas. Demonstramos ainda, pela primeira vez, por imunofluorescência, a co-localização citoplasmática da Anexina A2 (ANXA2) e Citoqueratina 10 (CK10) na linhagem celular MDA-MB-231, sugerindo um novo comportamento molecular dessas proteínas em CM-triplo negativo (CMTN). Análises de docking molecular confirmaram a interação entre o FabC4 e os peptídeos, com melhor cobertura e identidade para pC4. Este peptídeo também mimetizou as regiões das proteínas ANXA2 e CK10 responsáveis por se ligaram ao FabC4. Portanto, nossa estratégia resultou na descrição de biomoléculas com potencial uso diagnóstico do CMTN e no mapeamento bem-sucedido dos epítopos do FabC4, abrindo novos caminhos na compreensão e no tratamento do CMTN.pt_BR
dc.publisher.countryBrasilpt_BR
dc.publisher.programPrograma de Pós-graduação em Genética e Bioquímicapt_BR
dc.sizeorduration74pt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICASpt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA MOLECULAR E DE MICROORGANISMOSpt_BR
dc.subject.cnpqCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA::GENETICA HUMANA E MEDICApt_BR
dc.identifier.doihttp://dx.doi.org/10.14393/ufu.di.2018.811pt_BR
dc.crossref.doibatchidpublicado no crossref antes da rotina xml-
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