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ORCID:  http://orcid.org/0000-0002-9034-3650
Document type: Tese
Access type: Acesso Embargado
Embargo Date: 2023-06-08
Title: Caracterização genética e de virulência de Nc-UDI4, isolado de Neospora caninum, obtido em galinha
Alternate title (s): Virulence and genetic characterization of Nc-UDI4, isolated of Neospora caninum, obtained in chicken
Author: Silva, Mariana Ferreira
First Advisor: Mineo, Tiago Wilson Patriarca
First member of the Committee: Duarte, Erica dos Santos Martins
Second member of the Committee: Gondim, Luís Fernando Pita
Third member of the Committee: André, Marcos Rogério
Fourth member of the Committee: Vieira, Carlos Ueira
Summary: Neospora caninum é um protozoário que pertence ao filo Apicomplexa, possui ampla distribuição mundial e é o causador da neosporose. Essa doença possui grande importância econômica pois causa abortamentos em bovinos. Atualmente não há tratamento e nem vacinas e, por isso, o estudo do parasito e das suas relações com o meio ambiente é de suma importância. Sabe-se que aves são reservatórios de N. caninum, porém o papel da neosporose nestes hospedeiros ainda não está claro. O presente trabalho busca caracterizar o genótipo de uma nova cepa de N. caninum, descrita como Nc-UDI4, isolada do cérebro de uma galinha da região de Uberlândia/MG. Buscou-se ainda compreender o comportamento biológico desta cepa comparando-a com outras duas cepas de N. caninum, Nc-1 e Nc-Liverpool (Nc-Liv). Análises sorológicas mostraram que este novo isolado induz anticorpos específicos anti- N. caninum em camundongos e, através da reação de cadeia em polimerase (PCR), identificou-se que Nc-UDI4 possui o gene Nc5 específico de N. caninum. Além disso, Nc-UDI4 teve uma taxa de alinhamento de 99,8% com o genoma de referência Nc-Liv, conforme as análises de sequenciamento de nova geração (NGS). Foram identificados polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs), inserções e deleções (InDels) entre Nc-UDI4 e Nc-Liv. Os principais genes que tiveram mutações foram os responsáveis pela adesão, invasão e sobrevivência do parasito e, conforme mostrado no ensaio de placa, Nc-UDI4 conseguiu invadir e se replicar menos que Nc-Liv. Foram feitas análises de microssatélites que dividiram os isolados de N. caninum em 2 clusters principais, sendo o genótipo de Nc-UDI4 mais próximo de cepas Argentinas e de Nc-1. Nc-UDI4 demonstrou ser menos virulento que Nc-Liv, pois induziu menor mortalidade de camundongos e perfil de citocinas diferente. Portanto, camundongos C57BL/6 infectados com Nc-UDI4 e Nc-1 conseguem ser mais resistentes a infecção por equilibrarem a resposta imune pró e anti-inflamatória, enquanto Nc-Liv modula essa resposta favorecendo a infecção do parasito no hospedeiro.
Abstract: Neospora caninum is a protozoan that belongs to the Apicomplexan phylum, has worldwide distribution and causes neosporosis. This disease induces abortions in cattle and has a significant economic impact. There are no treatment nor vaccines against the parasite so, it is important to study the parasite and its relationship with the environment. It is known that birds are reservoirs for N. caninum, but the actual relevance of neosporosis in birds it is not clear yet. In the present work we aimed to characterize the genotype of a new strain of N. caninum isolated from the brain of a chicken in the city of Uberlandia/MG, Brazil, and compare its biological features with Nc-1 and Nc-Liv. Serological analysis showed that this new strain induces anti-N. caninum antibodies in mice and, using polymerase chain-reaction (PCR), we amplified the Nc5 sequence in its genomic DNA. Furthermore, Nc-UD4 genome aligned 99,8% to the reference genome, Nc-Liv, according to new generation sequencing (NGS) analysis. We identify single nucleotide polymorphisms (SNPs) and insertions/deletions (InDels) between Nc-UDI4 and Nc-Liv. Genes related to adhesion, invasion and survival of the parasite were altered and, as we showed in plaque assay, Nc-UDI4 had lower invasion/replication rates compared to Nc-Liv. Microsatellite analysis shared N. caninum in two clusters and revealed that the genotype of Nc-UDI4 is closely related to the Argentinian strains and Nc-1. Nc-UDI4 and Nc-1 are less virulent than Nc-Liv, as it induced low mortality of C57BL/6 mice and also a different cytokine profile. In that sense, mice infected with Nc-UDI4 and Nc-1 are more resistant to the infection, allied to a more favourable balance of pro- and anti-inflammatory immune responses against N. caninum, while Nc-Liv modulated this response in its favor, contributing to a worst outcome to its host.
Keywords: Ave
Bird
Neospora caninum
NGS
Parasitismo
Parasitism
Area (s) of CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::PARASITOLOGIA::PROTOZOOLOGIA DE PARASITOS
Subject: Parasitismo
Aves
Language: por
Country: Brasil
Publisher: Universidade Federal de Uberlândia
Program: Programa de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia Aplicadas
Quote: SILVA, Mariana Ferreira. Caracterização genética e de virulência de Nc-UDI4, isolado de Neospora caninum, obtido em galinha. 2021.124 f. Tese (Doutorado em Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2021. DOI http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.296
Document identifier: http://doi.org/10.14393/ufu.te.2021.296
URI: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/32160
Date of defense: 8-Jun-2021
Appears in Collections:TESE - Imunologia e Parasitologia Aplicadas

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